Ошибки устранение: Руководство по устранению ошибок остановки и непредвиденного перезапуска. — Windows Server

Руководство по устранению ошибок остановки и непредвиденного перезапуска. — Windows Server

• 
  Статья
• 
  03/02/2023
• Чтение занимает 6 мин
• 
  

Попробуйте наш виртуальный агент. Он поможет быстро выявить и устранить распространенные проблемы с загрузкой Windows.

Это решение предназначено для устранения неполадок в сценариях остановки ошибок.

Нет простого объяснения причины ошибок остановки (также называемых ошибками синего экрана или ошибками проверки ошибок). Может быть задействовано множество факторов, и причина не всегда является очевидной. Например, вы можете использовать новое оборудование или стороннее программное обеспечение, не совместимое с устройством Windows.

Контрольный список по устранению неполадок

1. Просмотрите коды ошибок stop, которые находятся в журнале событий. Найдите в Интернете конкретные коды ошибок остановки, чтобы узнать, есть ли известные проблемы, способы их устранения или обходные пути.

2. Убедитесь, что на жестком диске достаточно свободного места. Хотя требования к пространству могут различаться, рекомендуется, чтобы на диске было от 10 до 15 процентов свободного места.

3. Обратитесь к соответствующему поставщику оборудования или программного обеспечения, чтобы обновить драйверы и приложения в следующих сценариях:

   • Сообщение об ошибке указывает, что проблема связана с определенным драйвером.
   • Вы видите, что служба запускается или останавливается до возникновения сбоя. В этой ситуации определите, согласовано ли поведение службы во всех экземплярах сбоя.
   • Вы внесли любые изменения в программное обеспечение или оборудование.

4. Убедитесь, что установлены последние обновления Windows, накопительные обновления и накопительные обновления.

5. Убедитесь, что BIOS и встроенное ПО актуальны.

6. Выполните все соответствующие тесты оборудования и памяти.

7. Запустите средство проверки безопасности (Майкрософт) или любую другую программу обнаружения вирусов, которая включает проверки главной загрузочной записи на наличие заражения.

Распространенные проблемы и решения

Код проверки ошибок: KMODE_EXCEPTION_NOT_HANDLED

Остановите код ошибки:

0x0000001e

Если драйвер определен в сообщении об ошибке «Остановить», отключите или удалите его. Отключите или удалите все недавно добавленные драйверы или службы. Если ошибка возникает во время последовательности запуска и системный раздел форматируется с помощью файловой системы NTFS, вы можете использовать безопасный режим для отключения драйвера в диспетчер устройств. Для этого выполните следующие действия:

1. Перейдите к разделу «Восстановление безопасности>обновления & параметров>«. В разделе «Расширенный запуск» выберите » Перезапустить сейчас».
2. После перезапуска компьютера на экран выбора параметра выберите > «Устранение неполадок с дополнительнымипараметрами> приперезапуске параметров запуска>«.
3. После перезапуска компьютера вы увидите список параметров. Нажмите клавиши 4 или F4, чтобы запустить компьютер в безопасном режиме. Или, если вы планируете использовать Интернет в безопасном режиме, нажмите клавиши 5 или F5 для параметра «Безопасный режим с сетью «.

Код проверки ошибок: MEMORY_MANAGEMENT

Остановите код ошибки:

0x0000001A

При устранении этой проблемы запуск средства диагностики памяти Windows может быть полезен, чтобы исключить любые проблемы, влияющие на модули физической памяти. См . раздел 0x1A: MEMORY_MANAGEMENT.

Код проверки ошибок: SYSTEM_SERVICE_EXCEPTION

Остановите код ошибки:

0x0000003B

Этот код ошибки указывает, что в выполняемом коде было исключение, а поток, который был ниже, является системным потоком. Выполните следующие действия:

1. Если недавно были добавлены новые драйверы устройств или системные службы, попробуйте удалить или обновить их.
2. Просмотрите диспетчер устройств, чтобы узнать, помечены ли какие-либо устройства восклицательными знаками (!), чтобы указать на проблему. Просмотрите журнал событий, отображаемый в свойствах любого драйвера неисправного устройства. Попробуйте обновить связанный драйвер.
3. Проверьте системный журнал Просмотр событий дополнительные сообщения об ошибках, которые могут помочь определить устройство или драйвер, вызывающий ошибку. Найдите критические ошибки в системном журнале, произошедшие примерно в то же время, что и ошибка остановки.
4. Если вы недавно добавили оборудование в систему, попробуйте удалить или заменить его. Или обратитесь к производителю, чтобы узнать, доступны ли какие-либо обновления.

Код проверки ошибок: DRIVER_IRQL_NOT_LESS_OR_EQUAL

Остановите код ошибки:

0x000000D1

Этот код ошибки указывает, что драйвер попытался получить доступ к адресу, который можно просмотреть на странице (или который является полностью недопустимым), пока уровень запроса прерывания (IRQL) был слишком высоким. Это может быть вызвано следующими действиями:

• Разыменовыв неправильный указатель (например, NULL или освобожденный указатель) при выполнении на уровне или выше DISPATCH_LEVEL.
• Доступ к данным с доступом к страницам в DISPATCH_LEVEL.
• Выполнение страничного кода в DISPATCH_LEVEL.

Примечание.

Если драйвер, отвечающий за ошибку, можно определить, его имя отображается на экране.

Чтобы устранить эту проблему, проверьте системный журнал Просмотр событий на наличие дополнительных сообщений об ошибках, которые могут помочь определить устройство или драйвер, вызвавшего эту ошибку остановки. Если драйвер определен в сообщении об ошибке, отключите его или обратитесь к производителю за обновлениями драйвера. Убедитесь, что установленное новое оборудование совместимо с установленной версией Windows.

Код проверки ошибок: DRIVER_POWER_STATE_FAILURE

Остановите код ошибки:

0x0000009F

Этот код ошибки указывает, что драйвер находится в несогласованном или недопустимом состоянии питания. Выполните следующие действия:

1. Если недавно были добавлены новые драйверы устройств или системные службы, попробуйте удалить или обновить их. Попробуйте определить, что изменилось в системе, вызвавшее появление нового кода ошибки.
2. Просмотрите диспетчер устройств, чтобы узнать, помечены ли какие-либо устройства восклицательными знаками (!). Просмотрите журнал событий, отображаемый в окне свойств драйвера, для любого драйвера сбоя. Попробуйте обновить связанный драйвер.
3. Проверьте системный журнал Просмотр событий дополнительные сообщения об ошибках, которые могут помочь определить устройство или драйвер, вызывающий ошибку. Дополнительные сведения см. в разделе Просмотр событий. Найдите критические ошибки в системном журнале, возникшие в том же окне времени, что и синий экран.
4. Чтобы изолировать причину, временно отключите энергосберегние с помощью элемента Power Options в панель управления. Некоторые проблемы с драйверами связаны с различными состояниями режима гибернации системы, а также с приостановой и возобновлением работы системы.
5. Если вы недавно добавили оборудование в систему, попробуйте удалить или заменить его. Или обратитесь к производителю, чтобы узнать, доступны ли исправления.
6. Вы можете попробовать выполнить диагностику оборудования, предоставленную производителем системы.
7. Обратитесь к производителю, чтобы узнать, доступен ли обновленный системный ACPI/BIOS или другое встроенное ПО.

Дополнительные сведения о проверке ошибок см. в 0x9F.

Код проверки ошибок: SYSTEM_THREAD_EXCEPTION_NOT_HANDLED

Остановите код ошибки:

0x0000007e

Этот код ошибки указывает, что системный поток сгенерирует исключение, которое обработчик ошибок не перехватывает. Чтобы интерпретировать его, необходимо определить, какое исключение было создано. Выполните следующие действия:

1. Проверьте системный журнал Просмотр событий на наличие дополнительных сообщений об ошибках, которые могут помочь определить устройство или драйвер, вызывающий остановку 0x7E.
2. Если драйвер определен в сообщении об ошибке, отключите его или обратитесь к производителю за обновлениями драйвера.
3. Обратитесь к поставщику оборудования, чтобы узнать о любых обновлениях ACPI или другого встроенного ПО. Эта ошибка также может возникнуть из-за проблем с оборудованием, таких как несовместимость системы, конфликты памяти и конфликты IRQ.
4. Вы также можете отключить кэширование памяти (тени) BIOS, чтобы попытаться устранить ошибку. Также выполните диагностику оборудования, которую предоставляет производитель системы.
5. Убедитесь, что любое добавленное оборудование совместимо с установленной версией Windows.

Код проверки ошибок: Inaccessible_Boot_Device

Остановите код ошибки:

0x0000007b

Сведения об устранении этой проблемы см. в разделе «Дополнительные сведения об устранении неполадок при остановке ошибки 7B или Inaccessible_Boot_Device».

Сбор данных

Прежде чем обращаться в службу поддержки Майкрософт, можно собрать сведения о проблеме.

Предварительные требования

1. TSSv2 должны запускаться учетными записями с правами администратора в локальной системе, а лицензионное соглашение должно быть принято (после принятия лицензионного соглашения TSSv2 больше не будет запрашивать).
2. Мы рекомендуем использовать политику выполнения RemoteSigned PowerShell на локальном компьютере.

Примечание.

Если текущая политика выполнения PowerShell не позволяет выполнять TSSv2, выполните следующие действия:

• Задайте RemoteSigned политику выполнения для уровня процесса, выполнив командлет PS C:\> Set-ExecutionPolicy -scope Process -ExecutionPolicy RemoteSigned.
• Чтобы проверить, вступает ли изменение в силу, выполните командлет PS C:\> Get-ExecutionPolicy -List.
• Так как разрешения уровня процесса применяются только к текущему сеансу PowerShell, после закрытия заданного окна PowerShell, в котором выполняется TSSv2, назначенное разрешение для уровня процесса также возвращается в ранее настроенное состояние.

Сбор ключевых сведений, прежде чем обращаться в службу поддержки Майкрософт

1. Скачайте TSSv2 на всех узлах и распакуйте его в папку C:\tss_tool.

2. Откройте папку C:\tss_tool из командной строки PowerShell с повышенными привилегиями.

3. Запустите следующие трассировки на проблемном компьютере с помощью следующего командлета:

   TSSv2.ps1 -SDP PERF,SETUP
   

4. Ответ на запрос лицензионного соглашения.

5. Дождитесь завершения сбора необходимых данных автоматическими скриптами.

Трассировки будут храниться в ZIP-файле в папке C:\MS_DATA\SDP_PERFSETUP\ , которую можно отправить в рабочую область Майкрософт для анализа.

Ссылка

• Расширенное устранение неполадок с ошибкой остановки или ошибкой синего экрана

  • Дополнительные действия по устранению неполадок
  • Расширенное устранение неполадок с помощью средства проверки драйверов

• Параметры файла страницы

  • Общие сведения о файлах страниц
  • Определение соответствующего размера файла страницы

• Создание ядра или полный аварийный дамп

• Настройка параметров сбоя системы и восстановления в Windows

• Документация по устранению неполадок с производительностью клиентов Windows

Устранение ошибки в ЕГРН о границах земельных участков служит основанием для пересмотра дела

По словам одного из экспертов «АГ», на практике суды крайне неохотно удовлетворяют заявления о пересмотре судебных актов по вновь открывшимся обстоятельствам. Другая обратила внимание на то, что формальный подход в таких спорах недопустим, так как открывает широкие возможности для злоупотреблений, в том числе опасность пересмотра решений посредством установления новых фактов в других судебных процессах при наличии возможности заявить все возражения в одном судебном процессе.

Судебная коллегия по гражданским делам Верховного Суда вынесла Определение
№ 4-КГ20-37-К1 от 6 октября по пересмотру спора об определении границ земельных участков между соседями в связи с устранением реестровой ошибки в ЕГРН.

27 октября 2016 г. Солнечногорский городской суд Московской области удовлетворил
иск Анны Байрак к Владимиру и Елене Алтуховым о возложении обязанности освободить часть земельного участка и демонтировать возведенный на нем забор.

Впоследствии ответчики обратились в суд с заявлением о пересмотре судебного решения по вновь открывшимся обстоятельствам, ссылаясь на то, что решением суда от 4 декабря 2017 г. по их иску (дело
№ 2-3081/17) была исправлена реестровая ошибка в сведениях о местоположении границ земельных участков сторон спора по результатам проведенной судебной экспертизы. В связи с этим из ЕГРН были исключены существующие сведения и внесены исправленные сведения с указанием новых координат спорных участков. Изложенные сведения, отметили Алтуховы, не были известны на момент вынесения решения суда от 27 октября 2016 г., хотя они существенны для рассмотрения дела.

Суд первой инстанции отказал в удовлетворении требований под предлогом того, что устранение реестровой ошибки в сведениях ЕГРН о местоположении границ земельных участков сторон не является тем обстоятельством, с которым ст. 392 ГПК РФ связывает возможность пересмотра вступившего в законную силу судебного постановления. Решение суда было поддержано апелляцией и кассацией.

В кассационной жалобе в Верховный Суд Владимир и Елена Алтуховы поставили вопрос об отмене вышеуказанных судебных актов как незаконных.

После изучения материалов дела Судебная коллегия по гражданским делам ВС РФ напомнила, что сущность пересмотра судебных решений, определений по вновь открывшимся или новым обстоятельствам заключается в проверке судебных постановлений вынесшим их судом в связи с открытием новых обстоятельств, ставящих под сомнение законность и обоснованность вынесения таких постановлений.

Верховный Суд отметил, что решение Солнечногорского городского суда Московской области от 27 октября 2016 г. было основано на том, что фактическая граница (забор) земельного участка истца не соответствует сведениям государственного кадастра недвижимости, следовательно, она должна быть приведена в соответствие со сведениями ГКН. При вынесении решения суда от 4 декабря 2017 г. выяснилось, что в сведениях ГКН в отношении спорных земельных участков имеется реестровая ошибка, о наличии которой не было известно на момент вынесения судебного решения от 27 октября 2016 г. Тогда суд исправил реестровую ошибку в сведениях о местоположении границ земельных участков Анны Байрак и Алтуховых.

Как пояснил ВС, суд не связан правовой квалификацией заявленных истцом требований (спорных правоотношений), а должен рассматривать иск исходя из предмета и оснований (фактических обстоятельств), определяя по своей инициативе круг обстоятельств, имеющих значение для разрешения спора и подлежащих исследованию, проверке и установлению по делу, а также решить, какие именно нормы права применяются в конкретном спорном правоотношении.

«Таким образом, решение Солнечногорского городского суда Московской области от 4 декабря 2017 г., устанавливающее факт наличия реестровой ошибки, предполагает собой отмену ранее вносимых сведений в ЕГРН путем внесения новой записи, тем самым являясь отменой акта государственного органа. При таких обстоятельствах вывод суда об отказе в удовлетворении заявления Владимира Алтухова неправомерен», – отметил Верховный Суд, отменив акты нижестоящих судов и вернув дело на новое рассмотрение.

Адвокат АП г. Москвы Алина Емельянова
заметила, что в п. 9 Постановления Пленума Верховного Суда РФ от 11 декабря 2012 г. № 31 раскрываются необходимые условия, при установлении которых возможно ссылаться на п. 1 ч. 3 ст. 392 ГПК РФ в качестве основания для пересмотра судебного постановления, вступившего в законную силу. «Применительно к рассматриваемому спору очевидно, что установление судом факта ошибки в сведениях о местоположении границ смежных земельных участков и последующее исправление этой ошибки в ЕГРН способны повлиять на решение суда по делу об обязании перенести самовольно возведенное ограждение (забор) и относятся к этому делу», – отметила она.

По мнению эксперта, с определенной степенью условности можно говорить о том, что на момент рассмотрения первого спора ошибка уже содержалась в сведениях ЕГРН. «Однако, поскольку эта ошибка не была известна суду по первому делу, суд не мог исследовать ее и учесть при рассмотрении дела. Вместе с тем могу предположить, что указанное обстоятельство (ошибка в ЕГРН) могло быть известно истцу, что подтверждается обращением в суд с заявлением об ее исправлении. К сожалению, суды (в том числе ВС РФ) не исследовали и не отразили в судебных актах такой важный факт, как время возникновения сведений у заявителя о возможной ошибке в ЕГРН. Необходимо было ответить на вопрос: мог ли заявитель в момент рассмотрения первого дела знать об ошибке и заявить о ней?» – подчеркнула Алина Емельянова.

Адвокат добавила, что возможное возражение о том, что об ошибке стало известно в момент вынесения судебного решения по второму делу, не может быть принято судом по той причине, что само предположение о возможности ее существования было сформулировано заявителем в иске об ее исправлении. «То есть такое допущение могло возникнуть у истца до вынесения судебного решения по второму делу. При этом, как установлено в решении суда первой инстанции по делу об обязании перенести забор, границы и площади земельных участков сторонами не оспаривались. Стороны были ознакомлены с результатами экспертизы, частью которой в числе прочего был чертеж границ, отображающий фактические и кадастровые границы земельных участков», – пояснила эксперт.

Алина Емельянова полагает, что исчерпывающий перечень оснований для обжалования судебных актов по вновь открывшимся обстоятельствам направлен на соблюдение принципа правовой определенности. «Институт обжалования по вновь открывшимся обстоятельствам является исключительным способом пересмотра вступивших в законную силу судебных актов. Именно поэтому необходим повышенный стандарт доказывания обстоятельств и условий возможности пересмотра судебного акта. Формальный подход здесь недопустим. Иное открывает широкие возможности для злоупотреблений, в том числе опасность пересмотра решений посредством установления новых фактов в других судебных процессах при наличии возможности заявить все возражения в одном судебном процессе», – заключила она.

Адвокат, партнер АБ «КРП» Виктор Глушаков
отметил, что суды крайне неохотно удовлетворяют заявления о пересмотре судебных актов по вновь открывшимся обстоятельствам. «В описанном ВС РФ случае произошло именно то, что происходит в большинстве подобных споров, – в удовлетворении заявления о пересмотре судебного акта по вновь открывшимся обстоятельствам было отказано по формальным основаниям. Подход Верхового Суда я оцениваю положительно, но при этом не питаю иллюзий, что он будет положен в основу правоприменительного подхода. Скорее это единичный случай, который не будет иметь длительных последствий для практики», – полагает он.

Что такое пока-йоке? Защита от ошибок и ошибок

• Дом
  /
• Качественные ресурсы
  /
• Защита от ошибок

Глоссарий качества Определение: защита от ошибок

Также называется: пока-йоке, отказоустойчивость

Защита от ошибок или его японский эквивалент poka-yoke (произносится как PO-ka yo-KAY) — это использование любого автоматического устройства или метода, который либо делает невозможным возникновение ошибки, либо делает ошибку немедленно очевидной это произошло. Это обычный инструмент анализа процессов.

Когда использовать защиту от ошибок

• Когда был выявлен этап процесса, на котором человеческая ошибка может вызвать ошибки или дефекты, особенно в процессах, которые зависят от внимания, навыков или опыта работника
• В процессе обслуживания, когда клиент может допустить ошибку, которая повлияет на результат
• На этапе передачи в процессе, когда результат (или для сервисных процессов клиент) передается другому работнику
• Когда незначительная ошибка в начале процесса вызывает серьезные проблемы позже в процессе
• Когда последствия ошибки дороги или опасны

Процедура защиты от ошибок

1. Получите или создайте блок-схему процесса. Просматривайте каждый шаг, думая о том, где и когда вероятны человеческие ошибки.
2. Для каждой потенциальной ошибки повторите процесс, чтобы найти ее источник.
3. Для каждой ошибки подумайте о возможных способах сделать ее невозможной. Учитывать:
   • Устранение: устранение шага, вызвавшего ошибку.
   • Замена: замена ступени на безошибочную.
   • Упрощение: сделать правильное действие намного проще, чем ошибку.
4. Если вы не можете предотвратить возникновение ошибки, подумайте о способах обнаружения ошибки и сведения к минимуму ее последствий. Рассмотрим методы проверки, функции настройки и функции регулирования, подробно описанные ниже.
5. Выберите лучший метод защиты от ошибок или устройство для каждой ошибки. Протестируйте, а затем реализуйте. Три вида методов проверки обеспечивают быструю обратную связь:
   • Последовательная проверка выполняется на следующем этапе процесса следующим рабочим.
   • Самопроверка означает, что работники проверяют свою работу сразу же после ее выполнения.
   • Проверка источника проверяет правильность условий перед выполнением шага процесса. Часто это происходит автоматически и не позволяет процессу продолжаться до тех пор, пока условия не будут правильными.

Функции настройки и регулирования

Функции настройки — это методы проверки параметра процесса или атрибута продукта на наличие ошибок:

• Контактный или физический метод проверяет физическую характеристику, такую ​​как диаметр или температура, часто с использованием датчика .
• Метод пошагового перемещения или последовательности проверяет последовательность процесса, чтобы убедиться, что шаги выполняются по порядку.
• Метод фиксированного значения или группировки и подсчета подсчитывает повторения или части или взвешивает элемент для обеспечения полноты.
• Иногда добавляется четвертая функция настройки, улучшение информации, которая гарантирует, что информация доступна и воспринимаема, когда и где это необходимо.

Регулирующие функции — это сигналы, предупреждающие рабочих о возникновении ошибки:

• Предупреждающие функции — это звонки, зуммеры, световые сигналы и другие сенсорные сигналы. Рассмотрите возможность использования цветового кодирования, форм, символов и характерных звуков.
• Функции управления препятствуют продолжению процесса до тех пор, пока ошибка не будет исправлена ​​(если ошибка уже имела место) или условия не будут правильными (если проверка была исходной и ошибка еще не возникла).

Пример защиты от ошибок

Ресторан Parisian Experience стремился обеспечить высокое качество обслуживания за счет защиты от ошибок. Они рассмотрели схему развертывания (подробную блок-схему, которая показывает, кто выполняет каждый шаг) процесса рассадки, показанного ниже, и выявили человеческие ошибки со стороны персонала ресторана или клиентов, которые могли вызвать проблемы с обслуживанием.

Защита от ошибок: схема размещения ресторана

Первая потенциальная ошибка возникает при входе клиентов. Метрдотель может не заметить, что клиент ждет, если метрдотель провожает других клиентов к их столу, проверяет состояние стола или совещается с кухонным персоналом.

Устройство защиты от ошибок — электронный датчик на входной двери. Датчик посылает сигнал на вибрирующий пейджер на поясе метрдотеля, чтобы метрдотель всегда знал, когда кто-то входит или выходит из ресторана. Другие методы защиты от ошибок заменили этапы процесса, требующие, чтобы метрдотель отошел от входной двери, чтобы рассадить клиентов.

Выявлена ​​возможная ошибка со стороны клиентов на этапе вызова посетителей из зала, когда их стол готов. Они могут пропустить звонок, если в гостиной шумно, если они поглощены разговором или плохо слышат.

Группа выбрала средство защиты от ошибок, заменив этап процесса, когда метрдотель называл имя клиента по громкой связи. Вместо этого на этапе приветствия метрдотель отмечает уникальный визуальный идентификатор одного или нескольких членов группы. Когда стол готов, официант уведомляет официанта, который подходит к метрдотелю и учится идентифицировать клиентов. Официант находит клиентов в холле, провожает их к столику, дает им меню и принимает дополнительные заказы на напитки.

Этот метод защиты от ошибок не только устраняет проблему, связанную с клиентом, но и улучшает атмосферу в ресторане, устраняя надоедливый громкоговоритель, метрдотель остается у входной двери, чтобы приветствовать клиентов, создает ощущение исключительного обслуживания, когда официант « волшебным образом» знает клиентов и устраняет дополнительное время ожидания при передаче между метрдотелем и официантом.

Адаптировано из The Quality Toolbox, Second Edition , ASQ Quality Press.

Избранные рекламодатели

Рациональный подход «устранения ошибок» к оценке данных секвенирования нового поколения со штрих-кодом на молекулярном уровне идентифицирует низкочастотные мутации при гематологических злокачественных новообразованиях

Сохранить цитату в файл

Формат:

Резюме (текст)PubMedPMIDAbstract (текст)CSV

Добавить в коллекции

• Создать новую коллекцию
• Добавить в существующую коллекцию

Назовите свою коллекцию:

Имя должно содержать менее 100 символов

Выберите коллекцию:

Не удалось загрузить вашу коллекцию из-за ошибки
Повторите попытку

Добавить в мою библиографию

• Моя библиография

Невозможно загрузить делегатов из-за ошибки
Пожалуйста, попробуйте еще раз

Ваш сохраненный поиск

Название сохраненного поиска:

Условия поиска:

Тестовые условия поиска

Электронная почта:

(изменить)

Который день?

Первое воскресеньеПервый понедельникПервый вторникПервая средаПервый четвергПервая пятницаПервая субботаПервый деньПервый будний день

Который день?

ВоскресеньеПонедельникВторникСредаЧетвергПятницаСуббота

Формат отчета:

SummarySummary (text)AbstractAbstract (text)PubMed

Отправить максимум:

1 шт. 5 шт. 10 шт. 20 шт. 50 шт. 100 шт. 200 шт.

Отправить, даже если нет новых результатов

Необязательный текст в электронном письме:

Создайте файл для внешнего программного обеспечения для управления цитированием

. 2019 май; 21(3):471-482.

doi: 10.1016/j.jmoldx.2019.01.008.

Epub 2019 20 февраля.

Сарадхи Маллампати
¹
, Дзифа И Дуосе
²
, Майкл Хармон
³
, Минакши Мехротра
⁴
, Рашми Канагал-Шаманна
⁴
, Стефани Заллес
⁴
, Игнасио I Вистуба
²
, Сяопин Сунь
⁵
, Раджьялакшми Лутра
⁶

Принадлежности

• ¹ Кафедра лабораторной медицины, Онкологический центр доктора медицины Андерсона Техасского университета, Хьюстон, Техас; Отделение трансляционной молекулярной патологии, Онкологический центр доктора медицины Андерсона Техасского университета, Хьюстон, Техас.
• ² Отделение трансляционной молекулярной патологии, Онкологический центр им. М. Д. Андерсона Техасского университета, Хьюстон, Техас.
• ³ Baylor Miraca Genetics Laboratories, Хьюстон, Техас.
• ⁴ Отделение гематопатологии, Онкологический центр им. М. Д. Андерсона Техасского университета, Хьюстон, Техас.
• ⁵ Факультет лабораторной медицины Техасского университета Онкологический центр им. М. Д. Андерсона, Хьюстон, Техас. Электронный адрес: [email protected].
• ⁶ Отделение трансляционной молекулярной патологии, Онкологический центр им. М. Д. Андерсона Техасского университета, Хьюстон, Техас; Отделение гематопатологии, Онкологический центр доктора медицины Андерсона Техасского университета, Хьюстон, Техас. Электронный адрес: [email protected].

• PMID:

  30794984

• PMCID:

  PMC6521894

• DOI:

  10.1016/j.jmoldx.2019.01.008

Бесплатная статья ЧВК

Сарадхи Маллампати и др.

J Мол Диагн.

2019Может.

Бесплатная статья ЧВК

. 2019 май; 21(3):471-482.

doi: 10.1016/j.jmoldx.2019.01.008.

Epub 2019 20 февраля.

Авторы

Сарадхи Маллампати
¹
, Дзифа И Дуосе
²
, Майкл Хармон
³
, Минакши Мехротра
⁴
, Рашми Канагал-Шаманна
⁴
, Стефани Заллес
⁴
, Игнасио I Вистуба
²
, Сяопин Сунь
⁵
, Раджьялакшми Лутра
⁶

Принадлежности

• ¹ Факультет лабораторной медицины Техасского университета Онкологический центр им. М. Д. Андерсона, Хьюстон, Техас; Отделение трансляционной молекулярной патологии, Онкологический центр доктора медицины Андерсона Техасского университета, Хьюстон, Техас.
• ² Отделение трансляционной молекулярной патологии, Онкологический центр им. М. Д. Андерсона Техасского университета, Хьюстон, Техас.
• ³ Baylor Miraca Genetics Laboratories, Хьюстон, Техас.
• ⁴ Отделение гематопатологии, Онкологический центр им. М. Д. Андерсона Техасского университета, Хьюстон, Техас.
• ⁵ Факультет лабораторной медицины Техасского университета Онкологический центр им. М. Д. Андерсона, Хьюстон, Техас. Электронный адрес: [email protected].
• ⁶ Отделение трансляционной молекулярной патологии, Онкологический центр им. М. Д. Андерсона Техасского университета, Хьюстон, Техас; Отделение гематопатологии, Онкологический центр доктора медицины Андерсона Техасского университета, Хьюстон, Техас. Электронный адрес: [email protected].

• PMID:

  30794984

• PMCID:

  PMC6521894

• DOI:

  10.1016/j.jmoldx.2019.01.008

Абстрактный

Появление высокочувствительных подходов к молекулярной диагностике, таких как капельная цифровая ПЦР, позволило точно идентифицировать низкочастотные вариантные аллели в клинических образцах; однако мультиплексные возможности цифровой ПЦР капель для обнаружения вариантов недостаточны. Включение молекулярных штрих-кодов или уникальных идентификаторов в библиотеки секвенирования следующего поколения с помощью ПЦР позволило обнаружить низкочастотные вариантные аллели в нескольких областях генома. Однако рациональная подготовка библиотек и стратегии анализа данных секвенирования, включающие молекулярные штрих-коды, редко применялись в клинических условиях. В этом исследовании мы оценили параметры, которые имеют решающее значение при использовании молекулярных штрих-кодов в секвенировании следующего поколения для генотипирования клинических образцов от пациентов с гематологическими злокачественными новообразованиями. Было обнаружено, что единообразное включение молекулярных штрих-кодов в матрицы ДНК с помощью ПЦР имеет решающее значение, а степень единообразия зависела от множества взаимозависимых переменных. Стратегия устранения ошибок была разработана для устранения фоновых ошибок секвенирования с использованием информации о последовательности молекулярного штрих-кода в качестве альтернативы традиционному подходу к исправлению ошибок. Этот подход был успешно использован для выявления мутаций с частотой всего 0,15%, и была выявлена ​​клональная гетерогенность гемобластозов. Эти результаты имеют значение для выяснения гетерогенности и временной и пространственной эволюции клонов, оценки ответа на терапию и мониторинга рецидивов у пациентов с гематологическими злокачественными новообразованиями.

Copyright © 2019 Американское общество патологоанатомов и Ассоциация молекулярной патологии. Опубликовано Elsevier Inc. Все права защищены.

Цифры

Рисунок 1

Подготовка библиотеки для секвенирования следующего поколения (NGS)…

Рисунок 1

Рабочий процесс подготовки библиотеки, готовой к секвенированию нового поколения (NGS), для панели из 21 ампликона, содержащей молекулярный штрих-код. В…

Рисунок 1

Рабочий процесс подготовки библиотеки для секвенирования нового поколения (NGS) для панели из 21 ампликона, содержащей молекулярный штрих-код. Структура шпилек целевых специфических прямых праймеров содержит частичную последовательность адаптера P5 (5′-адаптер) и случайную нуклеотидную последовательность из 12 п.н. в виде последовательности молекулярного штрих-кода. Целевые обратные праймеры содержат частичную последовательность адаптера Р7 (3′-адаптера). Первую стадию ПЦР проводили с использованием прямого и обратного праймеров, специфичных к мишеням, и амплифицировали интересующую область размером от 130 до 211 п.н. Второй этап проводили с индексирующими праймерами Illumina. Частичные адаптерные последовательности Illumina P5 и P7, которые были включены в продукт ПЦР первой стадии, служили якорными последовательностями для праймеров ПЦР второй стадии; ампликоны, которые содержали полноразмерные адаптерные последовательности P5 и P7, были созданы с помощью ПЦР второго этапа. Эти библиотеки ампликонов были подвергнуты секвенированию на MiSeq с использованием пользовательских праймеров для секвенирования, а данные были проанализированы с помощью специального конвейера биоинформатики и программного обеспечения для анализа данных NextGENe NGS.

Рисунок 2

Оценка трех различных полимераз…

Рисунок 2

Оценка трех различных полимеразных мастер-миксов на первом и втором этапах…

Фигура 2

Оценка трех различных полимеразных мастер-миксов на первом и втором этапах ПЦР для подготовки библиотеки секвенирования. Реакционные смеси для амплификации собирали с помощью мастер-микса для генотипирования TaqMan, мастер-микса HotStarTaq Plus или смеси NEBNext Ultra II Q5 во время первой стадии ПЦР. Все продукты первой стадии ПЦР были собраны в мастер-миксе NEBNext Ultra II Q5 (9).0356 A ), мастер-микс HotStarTaq Plus ( B ) или мастер-микс TaqMan для генотипирования ( C ) для ПЦР второго этапа. Библиотеки очищали с помощью гранул твердофазной обратимой иммобилизации и анализировали на ДНК-биоанализаторе Agilent 2100. Целевая библиотека размером от 300 до 400 п.н. обозначается скобкой . Отметим, что фрагменты размером от 100 до 200 п.н. содержали преимущественно димеры праймеров. Зеленые и фиолетовые полосы обозначают нижний и верхний маркеры соответственно. Все образцы оценивали в трех повторностях.

Рисунок 3

Идентификация параметров, важных для…

Рисунок 3

Идентификация параметров, имеющих решающее значение для повышения качества секвенирования следующего поколения, содержащего молекулярный штрих-код…

Рисунок 3

Определение параметров, имеющих решающее значение для повышения качества библиотек для секвенирования следующего поколения, содержащих молекулярные штрих-коды. A: Обработка экзонуклеазой I снижает концентрацию димеров праймеров и повышает выход библиотек секвенирования. Продукты ПЦР первой стадии инкубировали с 1 мкл 10 ммоль/л Трис-Cl (рН 8,0) или экзонуклеазы I (20 ЕД/мкл) при 37°С в течение 30 минут. B: Определение оптимального количества циклов ПЦР второго этапа для подготовки библиотеки. Первую стадию ПЦР-амплификации проводили в мастер-миксе для генотипирования TaqMan. Затем продукты расщепляли экзонуклеазой I. ПЦР-амплификацию второй стадии с использованием смеси Ultra II Q5 проводили в течение 17, 20, 23 или 26 циклов. Продукты второй стадии ПЦР очищали с помощью шариков твердофазной обратимой иммобилизации и анализировали на ДНК-биоанализаторе Agilent 2100. C: Выбор размера эффективно устраняет димеры праймеров. Смеси геномной ДНК A (1% A375, 0,5% Raji, 0,1% ДНК NCI-1355 и 98,4% ДНК OCI-AML3; дорожки 1, 2, 5 и 6 соответственно) и B (1% NCI-1355, 0,5% Raji, 0,1% A375 и 98,4% ДНК OCI-AML3; дорожки 3, 4, 7 и 8 соответственно) были созданы и подвергнуты первой стадии ПЦР-амплификации, обработке экзонуклеазой I и второй стадии ПЦР-амплификации. Очищенные продукты второй стадии ПЦР использовали для селекции двойного размера с 056×/0,85× объемами твердофазных шариков с обратимой иммобилизацией, а выбранные по размеру библиотеки анализировали на ДНК-биоанализаторе Agilent 2100. Обратите внимание, что целевая библиотека размером от 300 до 400 п.н. обозначается цифрой 9.0356 кронштейны . Зеленые и фиолетовые полосы обозначают нижний и верхний маркеры соответственно. Все образцы оценивали в двух повторах ( В и С ) или в трех экземплярах ( А ).

Рисунок 4

Оценка библиотек, содержащих молекулярные штрих-коды…

Рисунок 4

Оценка библиотек, содержащих молекулярные штрих-коды, с помощью количественной ПЦР в реальном времени (кПЦР) и секвенирования следующего поколения…

Рисунок 4

Оценка библиотек, содержащих молекулярные штрих-коды, с помощью количественной ПЦР в реальном времени (кПЦР) и секвенирования нового поколения (NGS). A: оценка qPCR выбранных по размеру библиотек указывает на единообразное представление 21 ампликона в библиотеках. Обратите внимание, что все ампликоны присутствовали в пределах от 2 до 3-C _t значений разницы от медианы. B: NGS указывает на относительно единообразное представление 21 ампликона в библиотеках секвенирования. Библиотеки были секвенированы в двух независимых прогонах, и показано абсолютное количество прочтений для каждого ампликона. C: Анализ данных NGS без использования информации о молекулярном штрих-коде указывает на наличие обильных ложноположительных мутаций на низких частотах. Библиотеки, приготовленные из эталонной смеси ДНК, содержащей 98,4% (p.Q61L) NRAS , 1% (p.E285K) TP53 , 0,5% (p.R213Q; p.Y234H) TP53 , 0,5% (p. G13C) KRAS и 0,1% (p.V600E) BRAF мутаций секвенировали независимо дважды; показаны результаты одного цикла секвенирования. Обратите внимание, что ожидаемые мутации выше 0,3% аллельной частоты были явно выражены, хотя ложноположительные мутации появлялись в этом диапазоне в пределах ампликонов, охватывающих KRAS экзон 4 и NRAS экзон 3. Больше ложноположительных мутаций наблюдается между 0,05% и 0,3% аллельных частот, и истинная мутация BRAF (V600E) в этом диапазоне скрыта ложноположительными результатами.

Рисунок 5

Метод устранения ошибок (EE)…

Рисунок 5

Подход с устранением ошибок (EE) эффективно удаляет ложноположительные варианты, возникающие при низком…

Рисунок 5

Подход с устранением ошибок (EE) эффективно удаляет ложноположительные варианты, возникающие на низких частотах. Библиотеки, приготовленные из смеси геномной ДНК, содержащей 98,4% (p.Q61L) NRAS , 1% (p.E285K) TP53 , 0,5% (p.R213Q; p.Y234H) TP53 , 0,5% (p.G13C) ) КРАС и 0,1% (п.В600Э) мутаций BRAF секвенировали в двух независимых циклах. A: Схема распределения консенсусных чтений. Обратите внимание, что 50% консенсусных прочтений были получены из семейств молекулярных штрих-кодов с не менее чем четырьмя прочтениями секвенирования. B: Идентификация всех ожидаемых вариантов в положительной эталонной ДНК без получения ложноположительных вариантов до 0,05%. Обратите внимание, что консенсусные считывания, полученные из семейств молекулярных штрих-кодов с двумя или более считываниями секвенирования, использовались для идентификации вариантов. Показаны результаты отдельного цикла секвенирования. C: Определение рассчитанного размера семейства (FS), который дает каждое чтение консенсуса в выбранных положениях вариантов. Обратите внимание, что рассчитанная FS варьировалась от 5,5 до 10,7, что указывает на то, что каждое консенсусное считывание получено из семейства молекулярных штрих-кодов, которое содержит от 5,5 до 10,7 считываний секвенирования. Вычисленные значения FS были определены путем деления количества необработанных прочтений, охватывающих вариантную позицию (без получения консенсусного чтения), на количество прочтений, охватывающих ту же вариантную позицию после получения консенсусных прочтений.

Рисунок 6

Выявление низкочастотных мутаций вниз…

Рисунок 6

Выявление низкочастотных мутаций до 0,15% у пациентов с гематологическими злокачественными новообразованиями. А: Определение…

Рисунок 6

Выявление низкочастотных мутаций до 0,15% у пациентов с гематологическими злокачественными новообразованиями. A: Определение ожидаемой и наблюдаемой согласованности частот мутантных аллелей (MAF) в образцах. Ожидаемые частоты мутантных аллелей в 20 образцах были извлечены из результатов секвенирования панели конечного лейкоза из 81 гена, разработанной в лаборатории молекулярной диагностики MD Anderson CLIA. Обратите внимание, что панель конечной лейкемии идентифицирует мутации, которые присутствовали с частотой выше 1%. B: Низкочастотные мутационные профили, идентифицированные с помощью молекулярного штрих-кода, содержащего панель секвенирования нового поколения из 21 ампликона. Из 20 секвенированных образцов девять дали низкочастотные мутации.

Дополнительный рисунок S1

Метод устранения ошибок для…

Дополнительный рисунок S1

Метод исключения ошибок при удалении аллелей ложноположительных вариантов. А: Вывод…

Дополнительная фигура S1

Метод устранения ошибок при удалении аллелей ложноположительных вариантов. A: Получение согласованной последовательности считывания. Все чтения секвенирования сгруппированы в семейства на основе информации о молекулярном штрих-коде. Все считывания в пределах семейства имеют одну и ту же последовательность молекулярного штрих-кода; консенсусная последовательность считывания получается из этих чтений. Для любой выбранной позиции, если один и тот же нуклеотид присутствует во всех чтениях семейства, он выбирается в качестве консенсусного нуклеотида для этой позиции. Если часть ридов содержит определенный нуклеотид, а остальные риды содержат другой нуклеотид, консенсусному основанию для этой позиции присваивается буква 9.0426 Н . Обратите внимание, что в этом примере подчеркнутые нуклеотиды A и N являются консенсусными нуклеотидами, полученными из прочтений, которые имеют одну и ту же последовательность молекулярного штрих-кода. N обозначает нуклеотидную неоднозначность назначенного положения. B: Идентификация аллелей истинного варианта. Вариантные аллели определяются из производных консенсусных последовательностей считывания каждого семейства молекулярных штрих-кодов. В этом примере часть прочтений содержит нереференсный нуклеотид А; это истинный вариантный аллель, на долю которого приходится 20% аллельной частоты. N был неоднозначным и был исключен во время определения вариантного аллеля. Положения эталонной последовательности, в которых показаны варианты в стопках ридов секвенирования, обозначены синим цветом; варианты положений в исходных чтениях секвенирования или производных консенсусных чтениях показаны оранжевым цветом, а соответствующие положения нуклеотидов дикого типа обозначены синим цветом. оранжевые и черные стрелки обозначают ожидаемые частоты мутантных аллелей в положениях, где варианты были и не были обнаружены, соответственно.

Дополнительный рисунок S2

Показатели выборочного распределения для…

Дополнительный рисунок S2

Показатели выборочного распределения для общих и пригодных для использования согласованных последовательностей. Каждая согласованная последовательность…

Дополнительный рисунок S2

Показатели распределения по выборке для общих и пригодных для использования согласованных последовательностей. Каждая консенсусная последовательность была получена из группы прочтений секвенирования, которые имеют один и тот же уникальный молекулярный штрих-код. Обратите внимание, что количество прочтений секвенирования в каждой группе указывает размер каждого семейства молекулярных штрих-кодов. Общие консенсусные последовательности включают все консенсусные последовательности, полученные из семейств молекулярных штрих-кодов, с размером ≥1; однако пригодные для использования консенсусные последовательности включают только те, которые получены из семей с размером ≥2. В среднем 87% всех консенсусных последовательностей (181 670 из 206,914) можно было использовать для идентификации вариантов. PR, положительный отзыв.

Дополнительный рисунок S3

Метод устранения ошибок…

Дополнительный рисунок S3

Метод устранения ошибок эффективно устраняет ошибки до 0,05 %. Обратите внимание, что…

Дополнительный рисунок S3

Метод устранения ошибок эффективно устраняет ошибки до 0,05 %. Обратите внимание, что ошибки были обнаружены в пределах от 0 до 32 нуклеотидов на ампликон, и что эти ошибки были полностью устранены с помощью подхода устранения ошибок. Показаны результаты отдельного цикла секвенирования.

Дополнительный рисунок S4

Анализ покрытия вариантов…

Дополнительный рисунок S4

Анализ охвата вариантов, обнаруженных в образцах, взятых у пациентов с гематологическими злокачественными новообразованиями.…

Дополнительный рисунок S4

Анализ охвата вариантов, обнаруженных в образцах, взятых у пациентов с гематологическими злокачественными новообразованиями. Каждый узел на оси x указывает на один вариант. Покрытие напрямую указывает на количество уникальных молекулярных штрих-кодов или консенсусных прочтений, поддерживающих либо аллель дикого типа (WT), либо мутантный (Mut) аллель, либо только мутантный аллель. Обратите внимание, что наблюдаемое среднее покрытие 17 085 для каждой целевой области предполагает, что каждая целевая область покрыта в среднем 17 085 уникальными молекулярными штрих-кодами. В конвейере биоинформатики для выявления истинных вариантов минимальное требуемое покрытие вариантов было установлено на 10 для однонуклеотидных вариантов и на 15 для вставок и делеций. Ожидается, что при этом пороге покрытия вариантов и наблюдаемом общем охвате 17 085 истинные однонуклеотидные варианты, а также вставки и делеции будут идентифицированы с частотой 0,058% и 0,087% соответственно.

См. это изображение и информацию об авторских правах в PMC

Похожие статьи

• Простое мультиплексное штрих-кодирование ДНК на основе ПЦР позволяет точно обнаруживать мутации в жидких биоптатах с помощью секвенирования.

  Стольберг А., Кржижановский П.М., Джексон Дж.Б., Эгюд М., Штейн Л., Годфри Т.Е.

  Стольберг А. и соавт.
  Нуклеиновые Кислоты Res. 20 июн 2016;44(11):e105. дои: 10.1093/нар/gkw224. Epub 2016 7 апр.
  Нуклеиновые Кислоты Res. 2016.

  PMID: 27060140
  Бесплатная статья ЧВК.

• Создание библиотек штрих-кодов для мультиплексного высокопроизводительного секвенирования.

  Кнапп М., Стиллер М., Мейер М.

  Кнапп М. и соавт.
  Методы Мол Биол. 2012;840:155-70. doi: 10.1007/978-1-61779-516-9_19.
  Методы Мол Биол. 2012.

  PMID: 22237533

• Влияние точности полимеразы на частоту фоновых ошибок при секвенировании нового поколения с использованием уникальных молекулярных идентификаторов/штрих-кодов.

  Филгес С., Ямада Э., Стольберг А., Годфри Т.Е.

  Филгес С. и соавт.
  Научный представитель 2019 г. 5 марта; 9 (1): 3503. doi: 10.1038/s41598-019-39762-6.
  Научный представитель 2019.

  PMID: 30837525
  Бесплатная статья ЧВК.

• Цифровая ПЦР: надежный инструмент для анализа и мониторинга гематологических злокачественных новообразований.

  Коккаро Н., Тота Г., Анелли Л., Загария А., Спеккиа Г., Альбано Ф.

  Кокаро Н. и др.
  Int J Mol Sci. 2020 29 апреля; 21 (9): 3141. дои: 10.3390/ijms21093141.
  Int J Mol Sci. 2020.

  PMID: 32365599
  Бесплатная статья ЧВК.

  Обзор.

• Мониторинг минимального остаточного заболевания с помощью методологий секвенирования нового поколения при гематологических злокачественных новообразованиях.